江門供應(yīng)TB批發(fā)
發(fā)布時間：2025-09-25 00:36:26
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熒光原位雜交儀的探針有DNA探針和RNA探針，可對動物組織和植物組織中核酸進(jìn)行檢測，特異性較高。雜交所用的探針大致可以分為三類：（1）染色體特異重復(fù)序列探針；（2）全染色體或染色體區(qū)域特異性探針；（3）原位雜交儀特異性位置探針，由一個或幾個克隆序列組成。探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物系標(biāo)記的dUTP經(jīng)過缺口平移法進(jìn)行標(biāo)記；而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸蔌磷酸戊糖骨架共價結(jié)合，或在缺口平移法標(biāo)記探針時將熒光素核苷三磷酸摻入。
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熒光原位雜交儀是利用熒光探針與染色體結(jié)合，并且結(jié)合部分的序列顯示出高度的互補(bǔ)性。熒光探針與染色體結(jié)合的部分通常使用熒光顯微鏡觀察。FISH為研究人員提供了一種新的來可視化或繪制單個細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)，包括特定基因或基因的一部分的方法。它是了解各種染色體異常和其他基因突變的重要工具。與用于染色體研究的大多數(shù)其他技術(shù)不同，F(xiàn)ISH不需要對活躍分裂的細(xì)胞進(jìn)行，這使其成為一種非常通用的程序。
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昆蟲細(xì)胞表達(dá)重組蛋白涉及兩代病毒的制備工作，簡稱為P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表達(dá)預(yù)實(shí)驗(yàn)以及擴(kuò)增P2代病毒，P2代病毒用于大規(guī)模蛋白表達(dá)制備服務(wù)。昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)適合于膜蛋白的重組表達(dá)，4次及以下跨膜蛋白幾乎可以有效地在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)和純化。膜蛋白的純化是一件比較耗時耗力的事情。但是昆蟲蛋白表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢在于，利用病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染，操作相對容易，轉(zhuǎn)染體系容易形成（相對哺乳動物瞬時轉(zhuǎn)染體系）。
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首先，成功率！原位雜交儀可以大大提高您實(shí)驗(yàn)的成功率。全程由機(jī)器程序控制的變性、復(fù)性過程避免了手工操作過程中的不確定性，同時也避免了甲酰胺、水浴鍋等因素造成的影響。一次FISH實(shí)驗(yàn)僅探針便價值逾千元，如果因?yàn)椴僮魇д`而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果作廢，損失相當(dāng)慘重。若干次實(shí)驗(yàn)失誤的損失便足以購買一臺雜交儀了。其次，效率！原位雜交儀可大大增進(jìn)您工作的效率，一臺ThermoBrite雜交儀可同時進(jìn)行12個樣本的雜交工作，試想，如果您要同時手工操作12個樣本的變性、梯度脫水，干燥、加探針、預(yù)熱雜交盒、雜交的過程，是一件多么繁瑣且耗時的工作！
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蛋白同位素標(biāo)記是經(jīng)典的一種蛋白示蹤和蛋白組學(xué)定量技術(shù)，與體外標(biāo)記技術(shù)相比，同位素標(biāo)記技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記。原理：用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素 (重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)5-6個倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸全部摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)一級質(zhì)譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對定量。